ການກັ່ນຕອງ fluorescence ແມ່ນອົງປະກອບທີ່ສໍາຄັນໃນກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence.ລະບົບປົກກະຕິມີສາມຕົວກອງພື້ນຖານ: ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ, ການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດແລະກະຈົກ dichroic.ພວກມັນຖືກຫຸ້ມຫໍ່ໂດຍທົ່ວໄປໃນ cube ເພື່ອໃຫ້ກຸ່ມຖືກໃສ່ເຂົ້າກັນເຂົ້າໄປໃນກ້ອງຈຸລະທັດ.
ການກັ່ນຕອງ fluorescence ເຮັດວຽກແນວໃດ?
ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ
ຕົວກອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນສົ່ງແສງຂອງຄວາມຍາວຄື້ນສະເພາະ ແລະຕັນຄວາມຍາວຄື່ນອື່ນໆ.ພວກເຂົາສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຜະລິດສີທີ່ແຕກຕ່າງກັນໂດຍການປັບຕົວກອງເພື່ອໃຫ້ພຽງແຕ່ຫນຶ່ງສີຜ່ານ.ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນມີຢູ່ໃນສອງປະເພດຕົ້ນຕໍ - ການກັ່ນຕອງຜ່ານທາງຍາວແລະຕົວກອງຜ່ານແຖບ.ປົກກະຕິແລ້ວ exciter ແມ່ນຕົວກອງ bandpass ທີ່ຜ່ານພຽງແຕ່ຄວາມຍາວຄື່ນທີ່ຖືກດູດຊຶມໂດຍ fluorophore, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຕື່ນເຕັ້ນຂອງແຫຼ່ງ fluorescence ອື່ນແລະສະກັດແສງສະຫວ່າງ excitation ໃນແຖບການປ່ອຍອາຍພິດ fluorescence.ດັ່ງທີ່ສະແດງໂດຍເສັ້ນສີຟ້າໃນຮູບ, BP ແມ່ນ 460-495, ຊຶ່ງຫມາຍຄວາມວ່າມັນສາມາດຜ່ານ fluorescence ຂອງ 460-495nm ເທົ່ານັ້ນ.
ມັນຖືກຈັດໃສ່ຢູ່ໃນເສັ້ນທາງການສ່ອງແສງຂອງກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence ແລະການກັ່ນຕອງອອກຄວາມຍາວຄື່ນທັງຫມົດຂອງແຫຼ່ງແສງສະຫວ່າງຍົກເວັ້ນສໍາລັບລະດັບຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ fluorophore.ລະບົບສາຍສົ່ງຂັ້ນຕ່ຳຂອງຕົວກອງກຳນົດຄວາມສະຫວ່າງແລະຄວາມສະຫວ່າງຂອງຮູບພາບ.ການສົ່ງຕໍ່ຢ່າງໜ້ອຍ 40% ສໍາລັບຕົວກອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນໃດນຶ່ງແມ່ນແນະນຳໃຫ້ໃຊ້ວ່າລະບົບສາຍສົ່ງແມ່ນດີທີ່ສຸດ >85%.ແບນວິດຂອງການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນຄວນຈະຢູ່ໃນຂອບເຂດຄວາມຕື່ນເຕັ້ນຂອງ fluorophore ທັງຫມົດເຊັ່ນວ່າຄວາມຍາວຂອງຄື້ນກາງ (CWL) ຂອງການກັ່ນຕອງແມ່ນໃກ້ຊິດທີ່ສຸດເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ກັບຄວາມຍາວຂອງການກະຕຸ້ນສູງສຸດຂອງ fluorophore.ການກັ່ນຕອງຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ optical ຕື່ນເຕັ້ນ (OD) ກໍານົດຄວາມມືດຂອງພາບພື້ນຫລັງ;OD ແມ່ນການວັດແທກວ່າຕົວກອງຈະຕັນຄວາມຍາວຂອງຄື້ນນອກໄລຍະການສົ່ງ ຫຼື ແບນວິດໄດ້ດີປານໃດ.ແນະນໍາ OD ຕໍາ່ສຸດທີ່ 3.0 ແຕ່ OD ຂອງ 6.0 ຫຼືຫຼາຍກວ່ານັ້ນແມ່ນເຫມາະສົມ.
ການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດ
ການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດໃຫ້ບໍລິການຈຸດປະສົງຂອງການອະນຸຍາດໃຫ້ fluorescence ທີ່ຕ້ອງການຈາກຕົວຢ່າງທີ່ຈະເຂົ້າເຖິງເຄື່ອງກວດຈັບໄດ້.ພວກມັນສະກັດກັ້ນຄວາມຍາວຄື້ນທີ່ສັ້ນກວ່າ ແລະມີການສົ່ງສັນຍານສູງສຳລັບຄວາມຍາວຄື້ນທີ່ຍາວກວ່າ.ປະເພດການກັ່ນຕອງຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບຕົວເລກເຊັ່ນ BA510IF ໃນຮູບ (ຕົວກອງອຸປະສັກຂັດຂວາງ), ການອອກແບບດັ່ງກ່າວຫມາຍເຖິງຄວາມຍາວຂອງຄື້ນຢູ່ທີ່ 50% ຂອງການສົ່ງຂໍ້ມູນສູງສຸດຂອງມັນ.
ຄໍາແນະນໍາດຽວກັນສໍາລັບການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນຖືເປັນຄວາມຈິງສໍາລັບການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດ: ການສົ່ງສັນຍານຂັ້ນຕ່ໍາ, ແບນວິດ, OD, ແລະ CWL.ການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດທີ່ມີ CWL ທີ່ເຫມາະສົມ, ການສົ່ງຕໍ່ຂັ້ນຕ່ໍາ, ແລະປະສົມປະສານ OD ສະຫນອງຮູບພາບທີ່ສົດໃສທີ່ສຸດ, ດ້ວຍການສະກັດທີ່ເລິກທີ່ສຸດ, ແລະຮັບປະກັນການກວດພົບສັນຍານການປ່ອຍອາຍພິດ faintest.
ກະຈົກ Dichroic
ກະຈົກ dichroic ແມ່ນຖືກຈັດໃສ່ລະຫວ່າງຕົວກອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນແລະການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດຢູ່ທີ່ມຸມ 45 °ແລະສະທ້ອນສັນຍານຄວາມຕື່ນເຕັ້ນໄປສູ່ fluorophore ໃນຂະນະທີ່ສົ່ງສັນຍານການປ່ອຍອາຍພິດໄປຫາເຄື່ອງກວດຈັບ.ຕົວກອງ dichroic ທີ່ເຫມາະສົມແລະຕົວແຍກ beam ມີການຫັນປ່ຽນແຫຼມລະຫວ່າງການສະທ້ອນສູງສຸດແລະການສົ່ງສູງສຸດ, ມີການສະທ້ອນ > 95% ສໍາລັບແບນວິດຂອງການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນແລະການສົ່ງຕໍ່ > 90% ສໍາລັບແບນວິດຂອງການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດ.ເລືອກຟິວເຕີທີ່ມີຄວາມຍາວຂອງເສັ້ນຕັດກັນ (λ) ຂອງ fluorophore ຢູ່ໃນໃຈ, ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນແສງສະຫວ່າງທີ່ຫຼົ່ນລົງແລະເພີ່ມອັດຕາສ່ວນສັນຍານພາບຕໍ່ສຽງ fluorescent ໃຫ້ສູງສຸດ.
ກະຈົກ dichroic ໃນຕົວເລກນີ້ແມ່ນ DM505, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງມີຊື່ເພາະວ່າ 505 nanometers ແມ່ນຄວາມຍາວຂອງຄື້ນຢູ່ທີ່ 50% ຂອງສາຍສົ່ງສູງສຸດສໍາລັບກະຈົກນີ້.ເສັ້ນໂຄ້ງການສົ່ງຕໍ່ສໍາລັບກະຈົກນີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການສົ່ງໄຟຟ້າສູງຂ້າງເທິງ 505 nm, ການຫຼຸດລົງຂອງສາຍສົ່ງທາງຊ້າຍຂອງ 505 nanometers, ແລະການສະທ້ອນສູງສຸດໄປທາງຊ້າຍຂອງ 505 nanometers ແຕ່ຍັງມີບາງສາຍສົ່ງຕ່ໍາກວ່າ 505 nm.
ແມ່ນຫຍັງຄືຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງຕົວກອງຜ່ານທາງຍາວ ແລະແຖບຜ່ານ?
ການກັ່ນຕອງ fluorescence ສາມາດແບ່ງອອກເປັນສອງປະເພດ: long pass (LP) ແລະ band pass (BP).
ການກັ່ນຕອງຜ່ານທາງຍາວສົ່ງຄື້ນຄວາມຍາວແລະສະກັດທີ່ສັ້ນກວ່າ.ຄວາມຍາວຄື່ນຕັດແມ່ນຄ່າຢູ່ທີ່ 50% ຂອງການສົ່ງຜ່ານສູງສຸດ, ແລະຄວາມຍາວຂອງຄື້ນທັງໝົດຂ້າງເທິງຕົວຕັດແມ່ນສົ່ງຜ່ານຕົວກອງຍາວຜ່ານ.ພວກມັນຖືກນໍາໃຊ້ເລື້ອຍໆໃນກະຈົກ dichroic ແລະການກັ່ນຕອງການປ່ອຍອາຍພິດ.ການກັ່ນຕອງ Longpass ຄວນຖືກນໍາໃຊ້ໃນເວລາທີ່ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການລວບລວມການປ່ອຍອາຍພິດສູງສຸດແລະໃນເວລາທີ່ການຈໍາແນກ spectral ແມ່ນບໍ່ຕ້ອງການທີ່ຈະຫຼືມີຄວາມຈໍາເປັນ, ເຊິ່ງໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວແມ່ນກໍລະນີສໍາລັບ probes ທີ່ສ້າງຊະນິດດຽວ emitting ໃນຕົວຢ່າງທີ່ມີລະດັບຕ່ໍາຂອງ autofluorescence ພື້ນຖານ.
ຕົວກອງຜ່ານແຖບສົ່ງພຽງແຕ່ແຖບຄວາມຍາວຄື່ນທີ່ແນ່ນອນ, ແລະປິດກັ້ນອື່ນໆ.ພວກເຂົາເຈົ້າຫຼຸດຜ່ອນ crosstalk ໂດຍອະນຸຍາດໃຫ້ພຽງແຕ່ສ່ວນທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດຂອງ spectrum ການປ່ອຍອາຍພິດ fluorophore ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດ, ຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງລົບກວນ autofluorescence ແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປັບປຸງອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສິ່ງລົບກວນໃນຕົວຢ່າງ autofluorescence ພື້ນຫລັງສູງ, ເຊິ່ງການກັ່ນຕອງຜ່ານຍາວບໍ່ສາມາດສະເຫນີໄດ້.
ຊຸດການກັ່ນຕອງ fluorescence ປະເພດໃດທີ່ BestScope ສາມາດສະຫນອງໄດ້?
ບາງປະເພດຂອງການກັ່ນຕອງທົ່ວໄປປະກອບມີການກັ່ນຕອງສີຟ້າ, ສີຂຽວ, ແລະ ultraviolet.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ.
| ຊຸດການກັ່ນຕອງ | ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ | ກະຈົກ Dichroic | ການກັ່ນຕອງອຸປະສັກ | ຄວາມຍາວຂອງໂຄມໄຟ LED | ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC: ວິທີ fluorescent antibody ·ສົ້ມອາຊິດ: DNA, RNA · Auramine: Tubercle bacillus · EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine, TRITC: ວິທີການຕ້ານການ fluorescent · Propidium iodide: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · ການສັງເກດການ fluorescence ອັດຕະໂນມັດ · DAPI: ການຍ້ອມສີ DNA · Hoechest 332528, 33342: ໃຊ້ສໍາລັບການຍ້ອມສີ Chromosome |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines · 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline: ໂຄງກະດູກ, ແຂ້ວ |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
ຊຸດການກັ່ນຕອງທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການຊື້ fluorescence ໄດ້ຖືກອອກແບບປະມານຄວາມຍາວຄື້ນທີ່ສໍາຄັນທີ່ໃຊ້ໃນການນໍາໃຊ້ fluorescence, ເຊິ່ງອີງໃສ່ປະມານ fluorophores ທີ່ໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດ.ສໍາລັບເຫດຜົນນີ້, ພວກເຂົາຍັງຖືກຕັ້ງຊື່ຕາມ fluorophore ທີ່ພວກເຂົາມີຈຸດປະສົງສໍາລັບການຖ່າຍຮູບເຊັ່ນ DAPI (ສີຟ້າ), FITC (ສີຂຽວ) ຫຼື TRITC (ສີແດງ) cubes filter.
| ຊຸດການກັ່ນຕອງ | ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ | ກະຈົກ Dichroic | ການກັ່ນຕອງອຸປະສັກ | ຄວາມຍາວຂອງໂຄມໄຟ LED |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas ແດງ | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
ເຈົ້າເລືອກຕົວກອງ fluorescence ແນວໃດ?
1. ຫຼັກການເລືອກການກັ່ນຕອງ fluorescence ແມ່ນເພື່ອໃຫ້ແສງ fluorescence / ການປ່ອຍອາຍພິດຜ່ານຈຸດສິ້ນສຸດຂອງພາບເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້, ແລະປິດກັ້ນແສງສະຫວ່າງທີ່ຫນ້າຕື່ນເຕັ້ນໃນເວລາດຽວກັນ, ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສຽງສູງສຸດ.ໂດຍສະເພາະສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງ multiphoton excitation ແລະກ້ອງຈຸລະທັດສະທ້ອນພາຍໃນທັງຫມົດ, ສິ່ງລົບກວນທີ່ອ່ອນແອຍັງຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການແຊກແຊງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຕໍ່ຜົນກະທົບຂອງຮູບພາບ, ດັ່ງນັ້ນຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບອັດຕາສ່ວນສັນຍານກັບສິ່ງລົບກວນແມ່ນສູງກວ່າ.
2. ຮູ້ຈັກຄວາມຕື່ນເຕັ້ນ ແລະ ລະດັບການປ່ອຍອາຍພິດຂອງ fluorophore.ເພື່ອສ້າງຊຸດການກັ່ນຕອງ fluorescence ທີ່ສ້າງຮູບພາບທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ, ມີຄວາມຄົມຊັດສູງທີ່ມີພື້ນຫລັງສີດໍາ, ການກັ່ນຕອງຄວາມຕື່ນເຕັ້ນແລະການປ່ອຍອາຍພິດຄວນຈະບັນລຸການສົ່ງສັນຍານສູງທີ່ມີ ripple passband ຫນ້ອຍທີ່ສຸດໃນທົ່ວພາກພື້ນທີ່ສອດຄ່ອງກັບຈຸດສູງສຸດຂອງ fluorophore excitation ຫຼືການປ່ອຍອາຍພິດ.
3. ພິຈາລະນາຄວາມທົນທານຂອງການກັ່ນຕອງ fluorescence.ການກັ່ນຕອງເຫຼົ່ານີ້ຕ້ອງຖືກ impervious ກັບແຫຼ່ງແສງສະຫວ່າງທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ສ້າງແສງ ultraviolet (UV) ທີ່ສາມາດນໍາໄປສູ່ການ "burnout", ໂດຍສະເພາະແມ່ນຂອງການກັ່ນຕອງ exciter ຍ້ອນວ່າມັນແມ່ນຂຶ້ນກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຫຼ່ງແສງສະຫວ່າງຢ່າງເຕັມທີ່.
ຮູບພາບຕົວຢ່າງ fluorescent ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ
ຊັບພະຍາກອນໄດ້ຖືກເກັບກໍາແລະຈັດຕັ້ງຢູ່ໃນອິນເຕີເນັດ, ແລະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອການຮຽນຮູ້ແລະການສື່ສານເທົ່ານັ້ນ.ຖ້າມີການລະເມີດໃດໆ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່ພວກເຮົາເພື່ອລຶບ.
ເວລາປະກາດ: ວັນທີ 09-09-2022